O Jambolão (Syzygium cumini L. Skeels) é uma planta originária da Ásia, de grande porte e possui frutos da cor roxo-escura. Esta planta apresenta propriedades antimicrobianas, anti-inflamatória, hipoglicemiante, entre outras. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana in vitro do extrato hexânico da semente da jamboleira, testando sua eficácia na inibição do crescimento de Salmonella enteritidis (ATCC 13076), Escherichia coli (ATCC 11229), Enterobacter aerogenes (ATCC 13047) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923). O extrato foi obtido a partir do despolpamento do fruto, seguido da desidratação e trituração da semente em hexâno, na proporção de 1:2 (m/v). Foi realizado o teste da difusão em ágar, conforme metodologia documento M100-S22 (Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, Twenty-second Informational Supplement). Em seguida, foi feito o teste de Concentração inibitória mínima (CIM), de acordo com o documento M07-A9 (Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically; Approved Standard – NinthEdition.). Os resultados indicaram que o extrato da semente de jambolão apresenta inibição da cepa de Staphylococcus aureus (ATCC 25923).